Quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow
Thiết bị, vật tư cần cho quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia
Trước khi thực hiện quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng giải pháp Veriflow, bạn cần chuẩn bị các thiết bị, vật tư sau đây
1. HỘP BỘ DỤNG CỤ VERIFLOW BREWPAL Cat. S IS6020
• ĐỆM A – Cat. Số IS0701 – 30 mL
• ĐỆM B –Cat. Số IS0702 – 15 mL
• KIT xét nghiệm BREWPAL™ – Cat. Số IS0121 – mỗi hộp 24 test
2. THUỐC THỬ PCR BREWPAL Cat. S IS0520200 – 45 µL
Hướng dẫn sử dụng có thể tải xuống từ www.biomerieux.com/techlib.
3. MÁY LUÂN NHIỆT VERIFLOW™ THERMOCYCLER
VERIFLOW™ – Cat. Số ISTC002
4. MÁY LY TÂM
Tương thích với ống Fancol 50 mL, có khả năng li Tâm tốc độ 3000 x g
5. PIPET VÀ ĐẦU CÔN
Loại có khả năng chuyển về thể tích 5 μL, 200 μL và 25 mL
6. ỐNG FANCOL 50ML (có thể ly tâm ở tốc độ 3000 x g (rcf))
7. OPTION
• Đối chứng dương BREWPAL™ POSITIVE CONTROL – Cat. Số ISEV022
• Máy đọc kết quả VERIFLOW™ CASSETTE READER – Cat.Số ISRD001
Ngoài ra, quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow chỉ cần yêu cầu phòng sạch cấp C hoặc sử dụng box cấy để có thể thao tác thực hiện. Vì thế, để thực hiện quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia này, không đòi hỏi kỹ thuật viên phải có trình độ cao và điều kiện quá khắc khe.
Quy trình kiểm tra Hop-Resistant Pediococcus và Lactobacillus bằng DrewPAL
Quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow gồm có các bước chính là thu thập và chuẩn bị mẫu, chạy PCR và đọc kết quả trên kit.
CHUẨN BỊ MẪU
Mẫu đối chứng dương
Mục đích: Trong quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow thì chuẩn bị mẫu đối chứng dương giúp chuẩn thao tác tiến hành của kỹ thuật viên
- Bước 1: Bảo quản trước khi sử dụng: mẫu đối chứng dương tính cần được bảo quản trong khoảng từ -15°C đến -31°C cho đến ngày hết hạn
ghi trên nhãn. - Bước 2: Trước khi sử dụng, đảm bảo rằng ống chứng dương đã được trộn đều. Chuyển 5 µL từ ống chứng dương đã rã đông vào ống
thuốc thử PCR đã rã đông.
Lưu ý: Chỉ mở ống thuốc thử PCR khi thêm chất đối chứng dương tính và đóng ống ngay sau khi thêm để tránh lây nhiễm chéo sang các
thuốc thử khác. Người dùng nên chuẩn bị mẫu đối chứng dương tính SAU KHI chuẩn bị xong tất cả các ống mẫu thử để giảm thiểu hơn nữa
khả năng lây nhiễm chéo.
Chuẩn bị mẫu đối chứng dương
- Bước 3: Thực hiện theo các hướng dẫn được cung cấp bên dưới để khuếch đại PCR và phân tích mẫu cassette.
Lưu ý: Sau khi rã đông, đối chứng dương chỉ có thể được giữ ở 2-8°C trong một tháng. Sau khi rã đông, không cấp đông và rã đông lại. Các
thành phần của bộ BREWPAL™ , bao gồm băng cassette và đệm (ĐỆM A và B), phải được bảo quản ở nhiệt độ phòng(+15°C/+25°C).
THUỐC THỬ PCRBREWPAL™ phải được bảo quản ở -15°C/-31°C.
Mẫu bia thành phẩm
Các bước chuẩn bị mẫu bia thành phẩm trong quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow
- Bước 1: Chuyển 25mL mẫu bia vào ống fancol 50mL
- Bước 2: Ly tâm fancol 50 mL cùng với mẫu trong 10 phút ở tốc độ 3000 x g
- Bước 3: Gạn phần nổi phía trên từ ống hình nón 50 mL (cẩn thận không làm xáo trộn phần lắng bên dưới).
- Bước 4: Hòa lại phần lắng trong ống fancol 50 mL với 250 μL ĐỆM A. Vortex đều.
- Bước 5: Hút 5 µL từ dung dịch tạo ở bước 4 sang BREWPAL™ PCR REAGENT
Các bước chuẩn bị mẫu bia thành phẩm trong quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow
Lưu ý: Chỉ mở BREWPAL™ PCR REAGENT khi thêm mẫu và đóng lại ngay sau đó để tránh lây nhiễm chéo giữa các ống.
- Bước 6: Đặt BREWPAL™ PCR REAGENT vào VERIFLOW™ THERMOCYCLER (máy luân nhiệt PCR), chọn chương trình “brewPAL” và
nhấn“START RUN”, theo hướng dẫn sử dụng VERIFLOW™ THERMOCYCLER. - Bước 7. Sau khi hoàn thành chương trình “brewPAL”, nhấn “STOP RUN” và chuyển sang phần Phân tích mẫu Cassette.
Mẫu dịch nấm men
Các bước chuẩn bị mẫu dịch nấm men trong quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow
- Bước 1: Chuyển 5mL hỗn hợp men vào fancol 50mL chứa 45mLdH2O.Trộn kỹ bằng cách đảo chiều 12-15lần cho đến khi hỗn hợp đồng nhất.
- Bước 2: Ly tâm fancol 50 mL trong 10 phút ở tốc độ 20 x g
- Bước 3: Hút 25 mL chất lỏng ở phía trên sang ống fancol 50 mL mới.
- Bước 4: Ly tâm ống fancol 50 mL được tạo ở bước 3 trong 10 phút ở tốc độ 3000 x g.Bước 5: Gạn bỏ phần dung dịch phía trên fancol, chỉ
lấy phần lắng ở dưới. - Bước 6: Hòa lại phần lắng trong fancol 50 mL với 1 mL ĐỆM A. Vortex đều
- Bước 7: Hút 5 µL từ dịch huyền phù được tạo ra ở bước 6 sang PCR BREWPAL™ REAGENT
Lưu ý: Chỉ mở BREWPAL™ PCR REAGENT khi thêm mẫu và đóng lại ngay sau đó để tránh lây nhiễm chéo giữa các ống. - Bước 8: Đặt BREWPAL™ PCR REAGENT vào VERIFLOW™ THERMOCYCLER, chọn chương trình “brewPAL” và nhấn “START RUN” (theo
hướng dẫn sử dụng VERIFLOW™ THERMOCYCLER) - Bước 9: Sau khi hoàn thành chương trình “brewPAL”, nhấn “STOP RUN” và chuyển sang phần Phân tích mẫu bằng Cassette
PHÂN TÍCH MẪU CASSETTE
Các bước phân tích và ghi kết quả trong quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow
- Bước 1: Lấy các ống ra khỏi máy luân nhiệt VERIFLOW™ THERMOCYCLER và thêm trực tiếp 4 giọt BUFFER B vào mỗi ống PCR
BREWPAL™ REAGENT. - Bước 2: Chuyển trực tiếp 200μL BREWPAL™PCR sang vị trí nhỏ mẫu với BREWPAL™ASSAY CASSETTE bằng pipet.
- Bước 3: Đợi trong khoảng 2 phút ±15 giây .
- Bước 4: Thêm tiếp 4 giọt ĐỆM B vào vị trí nhỏ mẫu của BREWPAL™ASSAY CASSETTE.
- Bước 5: Đợi trong khoảng 1 phút± 15giây.
Lưu ý: BREWPAL™ ASSAY CASSETTE cho kết quả chính xác trong vòng tối đa 120 phút - Bước 6: Kéo công tắc và ghi lại kết quả: 1 vạch màu đỏ (đối chứng) cho thấy kết quả âm tính, hai vạch màu đỏ cho kết quả dương
tính
Quy trình kiểm tra vi sinh vật gây hư hỏng bia bằng Veriflow giúp phát hiện và có biện pháp kiểm soát tốt hơn trong khâu sản xuất. Từ đó, có các biện pháp để ngăn ngừa nguy cơ nhiễm của vào bia thành phẩm, giúp doanh nghiệp bia phát triển bền vững hơn.
