Tin tức

Nguyên lý hoạt động của giải pháp Veriflow

Kết hợp các phương pháp khoa học mới, VERIFLOW ^® kết hợp công nghệ PCR điểm cuối mạnh mẽ với khả năng phát hiện dựa trên dòng chảy dọc.

Quá trình này bắt đầu bằng việc khuếch đại DNA mục tiêu, một bước thiết yếu trong chẩn đoán phân tử dựa trên PCR. Khuếch đại là quá trình tăng số lượng bản sao của một chuỗi DNA cụ thể (chữ ký DNA) đến mức có thể phát hiện được. Có một số công nghệ khuếch đại khác nhau, tuy nhiên VERIFLOW ^® sử dụng cách tiếp cận độc quyền, độc đáo.

Các enzyme độc ​​quyền được VERIFLOW ^{® sử dụng}trong quá trình khuếch đại được thiết kế chắc chắn và có khả năng chống lại sự ức chế. Điều này cho phép quá trình khuếch đại diễn ra mà không bị ảnh hưởng bởi các chất ức chế hiện diện tự nhiên trong nhiều mẫu khác nhau.

Phương pháp của Veriflow giúp phát hiện vi sinh vật gây hư hỏng bia

Các phương pháp truyền thống yêu cầu tinh chế mẫu nghiêm ngặt để loại bỏ các chất ức chế và đảm bảo khuếch đại thành công. Công nghệ cô lập enzyme và chất ức chế độc quyền của VERIFLOW loại bỏ nhu cầu tinh chế mẫu hoặc tách chiết DNA, nhờ đó giảm đáng kể độ phức tạp của quy trình xét nghiệm tổng thể. Sự cải thiện về quy trình làm việc và tính mạnh mẽ này cho phép một số lợi ích sẽ được thảo luận sâu hơn trong bản thảo này.

Bước tiếp theo trong quy trình phát hiện là phát hiện DNA mục tiêu được khuếch đại từ mẫu một cách hợp lý. Không giống như các phương pháp dựa trên PCR thời gian thực (RT) truyền thống, VERIFLOW ^® không sử dụng phát hiện quang học của DNA khuếch đại. Phát hiện quang học có một số nhược điểm bao gồm yêu cầu “làm sạch” mẫu để tránh nhiễu với cảm biến quang. Thay vào đó, việc sử dụng hệ thống phát hiện dấu hiệu DNA duy nhất cho phép VERIFLOW ^® thu được DNA khuếch đại trên một băng cassette cầm tay. DNA mục tiêu liên kết với vạch thử nghiệm trên băng cassette để cho phép giải thích kết quả dễ dàng.

Tiến bộ quan trọng cuối cùng trong quá trình phát triển giải pháp VERIFLOW là giải quyết khả năng DNA di chuyển qua một tập hợp mao mạch để đạt được khả năng phát hiện cuối cùng và hiển thị kết quả trong một băng cassette cầm tay. Giải pháp VERIFLOW ^® phát triển một phương pháp tiếp cận dòng chảy thẳng đứng mạnh mẽ và khả thi. Cách tiếp cận này, kết hợp với những sửa đổi về cả vật lý và vật liệu điều hòa dòng chảy, cho phép DNA nguyên vẹn đi đến vạch thử nghiệm cuối cùng một cách thành công.

Sử dụng công nghệ dòng chảy dọc để đọc kết quả

Tính năng này của công nghệ dòng chảy dọc cho kết quả tức thì và giảm đáng kể dòng chảy ngược, hai hạn chế liên quan đến công nghệ dòng chảy ngang, một loại công nghệ chẩn đoán nhanh thay thế. XÁC MINH ^® kết quả là định tính và định lượng bằng cách sử dụng Đầu đọc quang học cho phép phát hiện và liệt kê để đánh giá rủi ro vi sinh vật.

Ưu điểm vượt trội về công nghệ của giải pháp Veriflow

Giải pháp Veriflow không cần trích xuất DNA

Trong lịch sử, các phương pháp phân tử đã cải thiện đáng kể độ đặc hiệu và độ nhạy nhưng đắt tiền, cồng kềnh khi thực hiện và yêu cầu thiết bị chuyên dụng cũng như nhân viên được đào tạo chuyên sâu. Một số yếu tố góp phần dẫn đến chi phí cao là nhu cầu chuẩn bị mẫu phức tạp trước khi khuếch đại PCR, sau đó là phát hiện quang học các sản phẩm bằng thiết bị đắt tiền. Phương pháp dựa trên RT-PCR đòi hỏi các bước tách chiết DNA phức tạp do có chất ức chế trong bia. Sự ức chế PCR có thể được gây ra bởi sự bất hoạt của enzyme và/hoặc các tương tác không đặc hiệu giữa mồi và DNA mục tiêu.

Trong các phương pháp này, việc không sử dụng mẫu DNA có độ tinh khiết cao có thể làm tăng khả năng xảy ra kết quả dương tính giả và âm tính giả. XÁC MINH ^® được thiết kế để vượt qua những thách thức này. Công nghệ này sử dụng phương pháp không cần chiết DNA giúp giảm đáng kể thời gian chuyển mẫu từ túi tăng sinh sang ống PCR. Công nghệ đệm mạnh mẽ kết hợp với DNA polymerase kháng chất ức chế không chỉ mang lại độ ổn định và độ nhạy vượt trội mà còn cho phép khuếch đại hiệu quả các mục tiêu DNA trực tiếp từ các mẫu thực phẩm thô, do đó loại bỏ nhu cầu tinh chế DNA.

Hiệu suất của các biến thể enzyme này được nâng cao hơn nữa bằng cách sử dụng các chiến lược xử lý mẫu mới giúp đơn giản hóa, đẩy nhanh và giảm chi phí so với các xét nghiệm dựa trên PCR phức tạp. Việc loại bỏ quá trình tinh chế mẫu giúp giảm đáng kể nhiều thao tác mẫu, do đó giảm nguy cơ lỗi do người dùng.

Phản ứng PCR được bảo vệ hơn nữa khỏi khả năng bị nhiễm bẩn bằng cách thay thế dTTP (deoxythymidine triphosphate) bằng dUTP (deoxyuridine triphosphate) trong hỗn hợp dNTP (deoxynucleotide) cùng với Uracil-DNA Glycosylase (UDG). Trước khi bắt đầu PCR, hoạt động UDG sẽ tách bazơ uracil trong DNA chứa dUTP (khuếch đại) ngăn chặn quá trình tái khuếch đại của khuếch đại do nhiễm bẩn khuếch đại.

Trực quan hóa kết quả

Một trong những yếu tố thách thức nhất trong việc đáp ứng nhu cầu thử nghiệm phân tử của ngành bia là quy trình cần thiết để đơn giản hóa việc diễn giải dữ liệu. Việc sử dụng giải thích dữ liệu hoàn toàn dựa trên phần mềm làm tăng chi phí thiết bị và độ phức tạp của quy trình làm việc. Phí bảo trì hàng năm và hợp đồng dịch vụ cũng làm tăng thêm chi phí thiết bị vốn đã cao.
Giải pháp Veriflow là duy nhất. Hiển thị kết quả trong VERIFLOW ^® dựa vào công nghệ dòng chảy thẳng đứng được đặt bên trong một băng cassette cầm tay. Sau khi đưa mẫu vào, liên hợp protein-vàng dạng keo được bù nước và phản ứng với khuếch đại được đánh dấu trong mẫu. Hỗn hợp này chảy thẳng đứng lên màng nitrocellulose được cố định bằng kháng thể bắt giữ trên vạch thử.

Bộ khuếch đại, được kẹp giữa kháng thể liên hợp protein-vàng và kháng thể bắt giữ, tập hợp lại trên vạch thử nghiệm để tạo ra vạch màu đỏ thẫm có thể phát hiện được bằng mắt thường cho thấy sự hiện diện của ô nhiễm chỉ trong vòng ba phút sau khi đưa mẫu vào. Màng này cũng chứa một vạch kiểm soát, sao cho một vạch duy nhất biểu thị kết quả âm tính và hai vạch biểu thị kết quả dương tính.
Để thu được kết quả định lượng, cường độ vạch thử nghiệm có thể được đo bằng giải pháp Veriflow. Băng cassette phù hợp với giá đỡ của đầu đọc để đánh giá từng băng cassette riêng lẻ. Đầu đọc được lập trình với một đường cong hiệu chuẩn để đo tỷ lệ của đường thử với cường độ của đường điều khiển và tương quan giá trị đó với đường cong hiệu chuẩn. Sử dụng thuật toán tích hợp này, đầu đọc hiển thị kết quả định lượng (tế bào/mL) từ băng thử nghiệm, tạo ra con số chính xác liên quan đến cường độ vạch thử nghiệm.

Giải pháp Veriflow giúp phát hiện nhanh các vi sinh vật gây hư hỏng trong bia, rượu, nước quả. Đây được xem là một trong những giải pháp tối ưu và mang lại hiệu quả vượt trội mà các nhà nghiên cứu, kiểm soát chất lượng nên quan tâm. Nếu đang cần tư vấn thêm về Veriflow, đừng ngại liên hệ với công ty PTC để được tư vấn, hỗ trợ thêm. Cảm ơn bạn đã theo dõi bài viết!