Phương pháp định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong Thực Phẩm
1. Vi khuẩn hiếu khí là gì ?
Vi sinh vật hiếu khí là những vi sinh vật cần oxy phân tử để tồn tại và phát triển, hình thành nên khuẩn lạc khi nuôi cấy. Nhưng lại yêu cầu lượng phần trăm oxy trong môi trường sống ít hơn trong khí quyển thông thường.
Hiện nay, hàng loạt vụ ngộ độc thực phẩm, đồ uống từ mức độ nghiêm trọng ít đến mức độ cực kỳ nghiêm trọng xảy ra và đây chính là nguyên nhân ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe của người tiêu dùng và tiềm ẩn nhiều nguy cơ bệnh tật nguy hiểm về lâu về dài.
Đây cũng là một trong những chỉ tiêu trong kiểm tra vệ sinh thực phẩm trong quá trình sản xuất, vận chuyển và bảo quản. Chỉ tiêu này được xác định bằng phương pháp đếm khuẩn lạc mọc trên môi trường thạch dinh dưỡng; thể diện dưới dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (colony forming unit, CFU) trong một đơn vị khối lượng hay thể tích thực phẩm.
2. Phương pháp định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí bằng việc nuôi cấy trên bề mặt thạch
Tổng số vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm có thể được xác định bằng phương pháp nuôi cấy trên bề mặt thạch. Hoặc phương pháp hộp đổ thông qua số lượng khuẩn lạc đếm được trên đĩa petrifilm.
Các phương pháp này cho phép xác định lượng vi sinh vật có khả năng sinh trưởng trong môi trường mẫu ban đầu. Ngoài ra, hiện nay còn có các vật tư, dụng cụ hỗ trợ kiểm tra tổng số vi khuẩn hiếu khí nhanh hơn như đĩa petrifilm, dipslide,…
Các bước thực hiện :
Đồng nhất và pha loãng mẫu:
- Mẫu thực phẩm được cắt nhỏ hoặc sử dụng thiết bị dập mẫu vô trùng cho tới khi được đồng nhất,
- Cân chính xác 10g (hoặc 10ml) thực phẩm đã được chuẩn bị cho vào bình tam giác có chứa 90ml đệm pepton. Sau đó, lắc đều 2 – 3 phút thu được dung dịch mẫu thử ở 10-1
- Hút 1ml dung dịch mẫu thử ở 10-1 sang ống nghiệm có chứa sẵn 9ml đệm pepton. Sau đó, lắc đều 2 – 3 phút, thu được dung dịch mẫu thử 10-2 . Tiếp tục làm tương tự để có dung dịch pha loãng tiếp theo. Sử dụng máy pha loãng trọng lượng để tăng độ chính xác, tốc độ, độ vô trùng xử lý mẫu
Đổ đĩa và ủ mẫu
Sử dụng môi trường PCA để nuôi cấy vi sinh vật hiếu khí
- Dùng pipet hút 1ml mẫu thử cho vào đĩa petri, sau đó đổ 10 – 15ml môi trường đã pha vào đĩa
- Xoay nhẹ đĩa petri theo hai chiều trái, phải để trộn đều mẫu
- Để thạch đông, lật ngược đĩa và ủ ấm ở 370C trong thời gian 24-72 giờ
Đếm khuẩn lạc
Sau thời gian ủ, thực hiện đếm khuẩn lạc, có thể đếm bằng mắt thường hoặc máy đếm khuẩn lạc
Sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc thủ công để đêm khuẩn lạc vi khuẩn hiếu khí mọc, tính số lượng khuẩn lạc theo công thức
Trong đó:
N là số tế bào vi khuẩn trong 1g hay 1ml mẫu (CFU: colony forming units)
C: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên các hộp petri đã chọn (khoảng từ 25 – 250 khuẩn lạc/ đĩa)
Ni: số hộp petri cấy tại độ pha loãng thứ nhất
di: hệ số pha loãng tương ứng
v: thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào trong mỗi đĩa
Để rút ngắn thời gian trả kết quả, tăng độ chính xác và đáp ứng nhu cầu vi sinh hiện đại, PTN sử dụng thiết bị đếm khuẩn lạc tự động
Thiết bị đếm khuẩn lạc tự động IUL
Đếm khuẩn lạc tự động IUL, giúp KTV tăng độ chính xác và giảm thời gian làm việc, thiết bị đáp ứng tiêu chuẩn CFR21 Part 11, kết quả được trả vài giây, dễ dàng xuất kết quả báo cáo.
